" BCA法测定蛋白质是一种常用的蛋白质定量方法,其全称为Bicinchoninic acid法。该方法基于双缩脲反应,通过两步化学反应来测定蛋白质的浓度。
首先,在碱性环境下,蛋白质与二价铜离子络合并将二价铜离子还原为一价铜离子,形成蓝色复合物。然后,BCA(Bicinchoninic acid)与一价铜离子结合,形成稳定的蓝紫色复合物,该复合物在562 nm处有较高的吸光值,并与蛋白质浓度呈正比。
BCA法测定蛋白质具有以下优点:灵敏度高,最小检测蛋白量达到0.5 g,检测浓度下限达到25 g/mL;线性范围广,在25-2000 g/mL浓度范围内有较好的线性关系;操作简单,正常情况下可在45分钟内完成测定,比经典Lowry方法速度快四倍;兼容性好,BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20、60、80。
但是,BCA法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,DTT低于1mM,-Mercaptoethanol低于0.01%。
综上,BCA法测定蛋白质是一种快速、简便、灵敏、兼容性好的蛋白质定量方法,广泛应用于蛋白质提取后的定量检测。"